生物切片制作廠(chǎng)家與您分享切片制作方法
一、制備顯微標本的切片法
這是*常用的切片法。以石蠟作為組織的填充支持介質(zhì),將整塊組織加以包埋,*后凝固成均勻一致的固態(tài)結構。用切片機制取*薄的切片。為了讓石蠟能浸入組織內部,需將組織經(jīng)過(guò)脫水等處理。過(guò)程大致如下:
?、殴潭ǎ荷飿吮久撾x機體或培養環(huán)境,細胞會(huì )發(fā)生自溶,腐敗分解。因此,需用固定劑處理,使蛋白質(zhì)凝固停止瀕死或死后變化。凡供******保存的標本都需經(jīng)固定處理。
常用的固定劑是甲醛、乙醇等,能使蛋白質(zhì)凝固。還有由幾種試劑配成的固定液,例如Carnoy固定液,由無(wú)水酒精、氯仿、冰醋酸配成,固定力更快更強,不含水分,可避免水溶性物質(zhì)如糖原等在固定過(guò)程中損失。
?、泼撍菏菍⒔M織細胞所含水分除去。通常用乙醇(Alcohol,酒精),濃度遞升到100%。此過(guò)程還使組織塊進(jìn)一步硬化。
?、峭该鳎菏怯眉饶苋苡诩兙凭帜苋诮馐灥挠袡C溶劑,將組織中的酒精取代,以便石蠟浸入。通常用二甲苯(xylene)為透明劑。
?、冉灒涸跍叵鋬冗M(jìn)行。已透明的組織塊放入加熱融解的石蠟中,讓石蠟浸透組織,作為支持介質(zhì)。
?、砂瘢簩⒁呀灥慕M織塊放入熱融的包埋石蠟中,迅速冷凝,組織決便被蠟包埋。
?、是衅河们衅瑱C。常用的切片機有輪轉式、平推式的。用輪轉式的易于切出連續切片。切片厚度隨制片目的而調整。教學(xué)標本厚度多是5~6μm。
?、速N片烤干:石蠟切片在溫水上展平后,移在玻片上,烤干,即可供染色處理。染色后用樹(shù)膠、蓋坡片封固,可******保存。
二冷凍切片法
冷凍切片法是借組織在低溫下,凍結變硬而達到符合切片要求。冷凍切片法需有冷凍切片機,或在普通切片上配制冷設施。恒冷切片機是高級冷凍切片設備。它有一個(gè)恒冷箱,標本致冷臺和切片機都裝在箱內。恒冷箱的作用類(lèi)似冰箱,可在一定范圍內調整溫度,其結構有利于保持箱內恒定低溫,減少箱門(mén)打開(kāi)時(shí)環(huán)境溫度的干擾。切片機的輪轉把手裝在箱外,便于操縱切片。
冷凍切片法的優(yōu)點(diǎn)是:在處理得當時(shí),它可以******限度地保持組織的新鮮狀態(tài)。并且,由于不需經(jīng)脫水、透明、浸蠟等過(guò)程中有機溶劑的處理,及濕箱浸蠟熱的影響,甚至可不經(jīng)固定。所以能很好地保存組織細胞的各種成分和酶的活性,因此在酶的組織化學(xué)研究中常用此切片法。
二、顯示標本結構成分的染色法
一蘇木素伊紅染色法(HE染色法)
為*常用的染色法。該法應用于各種組織的染色,是組織學(xué)技術(shù)的基本方法,對任何液體固定的組織和各種包埋的切片均可使用,只是對不同包埋的切片法處理略有不同。下面簡(jiǎn)介石蠟包埋切片的HE染色法。
1、脫蠟:石蠟切片的組織內部充滿(mǎn)石蠟,不能使水溶性染液著(zhù)色,因此在染色前必須*先用二甲苯將石蠟脫掉,共兩次。
2、下行入水:將已脫蠟的標本浸入無(wú)水酒精及各級酒精,使組織逐步接近水。3、蒸餾水略洗。
4、蘇木素溶液染色約5—15分鐘
5、自來(lái)水洗去多余染料。
6、入稀釋的鹽酸酒精溶液中分色,邊分色邊鏡檢,至核呈紅紫色,細胞質(zhì)無(wú)
色為合適。
7、分色后用自來(lái)水或加數滴氨水堿化,直至細胞核變成藍色。這一步驟也可稱(chēng)為“藍化”。
8、入蒸餾水洗去堿性水分。
9、入70%酒精→80%酒精各5分鐘。
10、入伊紅染液染色30秒至數分鐘。
11、以95%酒精對伊紅分色,至胞漿,結締組織等呈桃紅色。
12、上行脫水:染色后的切片,因組織內含水而不透明,不能清晰地觀(guān)察其微細結構。因此,須將組織內的水分經(jīng)各級酒精→無(wú)水酒精逐步置換,*后進(jìn)入不含水份的透明劑內。
13、透明:入二甲苯透明劑,二次(各數分鐘)。
結果:細胞核藍紫色,胞漿、膠原纖維、肌纖維為桃紅色,嗜酸性顆粒為鮮紅色,彈性纖維呈明亮桃紅色。
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